Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mfn2/Mitofusin 2: sc-400536-ACT

MFN2 code la mitofusine 2 (Mfn2), une GTPase de type dynamine ancrée dans la membrane externe des mitochondries, qui médie la fusion mitochondriale et contribue au maintien d’un réseau mitochondrial interconnecté. Mfn2 participe également à l’ancrage (tethering) entre mitochondries et réticulum endoplasmique (RE), influençant le transfert de Ca2+, les échanges lipidiques, la bioénergétique mitochondriale et la mitophagie, intégrant ainsi la dynamique mitochondriale aux réponses cellulaires au stress. Par ces mécanismes, MFN2 modifie l’efficacité de la phosphorylation oxydative, l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène et les voies de signalisation liées à l’apoptose. Une dysrégulation de la fonction de MFN2 a été associée à des phénotypes de neurodégénérescence et de neuropathie périphérique, et le gène est souvent étudié dans des contextes de dysfonction métabolique et d’altération du contrôle qualité des organites.

Mfn2/Mitofusin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MFN2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mfn2/Mitofusin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MFN2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MFN2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mfn2/Mitofusin 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MFN2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mfn2/Mitofusin 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mfn2/Mitofusin 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de MFN2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.