Plásmido CRISPR de Activación (h) Mfn2/Mitofusin 2: sc-400536-ACT

MFN2 codifica la mitofusina 2 (Mfn2), una GTPasa tipo dinamina incrustada en la membrana mitocondrial externa que media la fusión mitocondrial y ayuda a mantener una red mitocondrial conectada. Mfn2 también contribuye al anclaje entre mitocondrias y retículo endoplásmico (RE), lo que influye en la transferencia de Ca2+, el intercambio de lípidos, la bioenergética mitocondrial y la mitofagia, integrando así la dinámica mitocondrial con las respuestas celulares al estrés. A través de estos procesos, MFN2 afecta la eficiencia de la fosforilación oxidativa, la homeostasis de las especies reactivas de oxígeno y la señalización relacionada con la apoptosis. La función desregulada de MFN2 se ha vinculado a fenotipos de neurodegeneración y neuropatía periférica, y se estudia con frecuencia en contextos de disfunción metabólica y control alterado de la calidad de los orgánulos.

Mfn2/Mitofusin 2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MFN2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Mfn2/Mitofusin 2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MFN2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MFN2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Mfn2/Mitofusin 2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MFN2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Mfn2/Mitofusin 2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Mfn2/Mitofusin 2 en células tumorales con expresión de MFN2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.