Plásmido Doble Nickase (h) Mfn1/Mitofusin 1: sc-400637-NIC

MFN1 codifica la mitofusina 1 (Mfn1), una GTPasa tipo dinamina incrustada en la membrana mitocondrial externa que media la fusión mitocondrial y contribuye al mantenimiento de la arquitectura de la red mitocondrial. Mediante la homo‑ y hetero‑oligomerización con MFN2 y el acoplamiento a la fusión de la membrana interna dependiente de OPA1, Mfn1 influye en la dinámica mitocondrial, la organización de las crestas y la producción bioenergética. La actividad de MFN1 se interrelaciona con la mitofagia, la señalización de apoptosis y la regulación de los contactos entre el retículo endoplásmico y las mitocondrias, modelando así las respuestas celulares al estrés metabólico y al control de calidad. En estudios mecanísticos, un desequilibrio alterado entre fusión y fisión mitocondrial que involucra a MFN1 se ha implicado en la neurodegeneración, la disfunción cardiometabólica y la remodelación metabólica asociada al cáncer.

Mfn1/Mitofusin 1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MFN1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MFN1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MFN1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MFN1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.