Plásmido CRISPR de Activación (h) MFAP4: sc-405012-ACT

MFAP4 (glicoproteína asociada a microfibrillas 4) codifica una glicoproteína de la matriz extracelular enriquecida en microfibrillas asociadas a fibras elásticas y expresada por tipos celulares mesenquimales y vasculares. MFAP4 participa en la organización de la matriz y en la comunicación célula–matriz, favoreciendo la adhesión y la señalización a través de vías vinculadas a integrinas que influyen en el comportamiento de las células de músculo liso, la actividad de los fibroblastos y la remodelación tisular. La expresión y el depósito desregulados de MFAP4 se estudian con frecuencia en contextos de remodelación vascular, recambio de la matriz extracelular asociado a fibrosis y respuestas estromales inflamatorias. Como factor asociado a la matriz, MFAP4 sirve como una lectura útil y como modulador en modelos que examinan la dinámica de la matriz extracelular, la mecanotransducción y los fenotipos dependientes del microambiente.

MFAP4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MFAP4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MFAP4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MFAP4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MFAP4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MFAP4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MFAP4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MFAP4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MFAP4 en células tumorales con expresión de MFAP4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.