METTL5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418556

Descripción general

METTL5 codifica una metiltransferasa de ARN dependiente de SAM que cataliza la deposición de N6-metiladenosina (m6A) en el ARNr 18S, lo que contribuye a moldear la estructura del ribosoma y el rendimiento de la traducción. Esta modificación se ha vinculado con la biogénesis ribosomal y con el ajuste fino de programas de síntesis proteica que sostienen el crecimiento celular y la adaptación al estrés. La regulación alterada de la maquinaria de metilación del ARNr, incluida la actividad de METTL5, se ha asociado con cambios en el control translacional observados en fenotipos del neurodesarrollo y en estados de expresión génica relacionados con el cáncer. En consecuencia, METTL5 se estudia en vías que conectan la epigenética del ARN con la proteostasis, la progresión del ciclo celular y la diferenciación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO METTL5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen METTL5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del METTL5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de METTL5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína METTL5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en METTL5 para la investigación de la señalización de METTL5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de METTL5 críticos para la función de METTL5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de METTL5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido METTL5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido METTL5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus METTL5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR METTL5 (h) y el plásmido HDR METTL5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología METTL5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana METTL5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.