Metaxin 2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405083-ACT

MTX2 codifica la metaxina 2, un componente della membrana mitocondriale esterna del complesso metaxin/SAM che supporta lo smistamento e l’inserzione delle proteine a barile β e contribuisce all’importazione delle proteine mitocondriali. Attraverso il suo ruolo nella biogenesi della membrana mitocondriale e nell’omeostasi dell’organello, MTX2 influenza la capacità di fosforilazione ossidativa, la morfologia mitocondriale e le risposte allo stress legate all’apoptosi e alla proteostasi. L’alterazione delle vie di importazione mitocondriale e di assemblaggio delle membrane è ampiamente rilevante per la biologia delle malattie neuromuscolari e neurodegenerative, nonché per il rimodellamento metabolico delle cellule tumorali. MTX2 è quindi utile per indagare i meccanismi che collegano l’organizzazione della membrana mitocondriale esterna alla sopravvivenza cellulare, al metabolismo energetico e al controllo qualità degli organelli.

Metaxin 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MTX2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Metaxin 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MTX2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MTX2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Metaxin 2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MTX2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Metaxin 2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Metaxin 2 nelle cellule tumorali con espressione di MTX2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.