Plásmido CRISPR de Activación (h) Metaxin 2: sc-405083-ACT

MTX2 codifica la metaxina 2, un componente de la membrana mitocondrial externa del complejo metaxina/SAM que facilita la clasificación y la inserción de proteínas β-barril y contribuye a la importación de proteínas mitocondriales. A través de su papel en la biogénesis de la membrana mitocondrial y la homeostasis del orgánulo, MTX2 influye en la capacidad de fosforilación oxidativa, la morfología mitocondrial y las respuestas al estrés relacionadas con la apoptosis y la proteostasis. La alteración de las vías de importación mitocondrial y de ensamblaje de membrana es ampliamente relevante para la biología de enfermedades neuromusculares y neurodegenerativas, así como para la reprogramación metabólica de células cancerosas. Por ello, MTX2 es útil para investigar mecanismos que acoplan la organización de la membrana mitocondrial externa con la supervivencia celular, el metabolismo energético y el control de calidad de los orgánulos.

Metaxin 2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MTX2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Metaxin 2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MTX2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MTX2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Metaxin 2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MTX2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Metaxin 2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Metaxin 2 en células tumorales con expresión de MTX2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.