Metallothionein 3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421733

Descripción general

Mt3 codifica la metalotioneína 3 (MT3), una proteína rica en cisteína que se une a metales y regula la disponibilidad intracelular de zinc y cobre, además de contribuir a la defensa celular frente al estrés oxidativo y electrofílico. Al amortiguar metales redox-activos y modular la señalización dependiente de zinc, MT3 puede influir en vías relacionadas con la homeostasis de especies reactivas de oxígeno, la proteostasis y la función mitocondrial. En tejidos de ratón, la expresión de MT3 es prominente en el sistema nervioso, donde se ha estudiado en relación con la diferenciación neuronal, la función sináptica y la neurotoxicidad asociada a metales. La desregulación del manejo de metales y de los mecanismos de estrés oxidativo en los que participa MT3 es relevante en modelos de neurodegeneración y de daño tisular asociado a inflamación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Metallothionein 3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Mt3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Mt3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Mt3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Metallothionein 3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Mt3 para la investigación de la señalización de Metallothionein 3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Mt3 críticos para la función de Metallothionein 3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Mt3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Metallothionein 3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Metallothionein 3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Mt3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Metallothionein 3 (m) y el plásmido HDR Metallothionein 3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Mt3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Mt3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.