Metallothionein 1F Double Nickase Plasmid (h): sc-417937-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Metallothionein 1F Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Metallothionein 1F Double-Nickase-Plasmid (h) und Metallothionein 1F Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MT1F abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Metallothionein 1F Double Nickase Plasmid (h) | sc-417937-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Metallothionein 1F Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417937-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MT1F kodiert Metallothionein 1F, ein niedermolekulares, cysteinreiches, metallbindendes Protein, das zur intrazellulären Homöostase essenzieller Spurenelemente wie Zink und Kupfer sowie zur Sequestrierung toxischer Metalle einschließlich Cadmium und Quecksilber beiträgt. Durch das Puffern labiler Zinkpools kann MT1F das Redoxgleichgewicht, die Aktivität metallabhängiger Enzyme und Transkriptionsprogramme beeinflussen, die auf oxidativen und elektrophilen Stress reagieren. Mitglieder der Metallothionein-Familie sind häufig mit zellulären Stressanpassungswegen verknüpft und können über thiolbasierte Redoxchemie die Empfindlichkeit gegenüber Metallbelastung und reaktiven Sauerstoffspezies modulieren. Eine veränderte Expression von MT1F wurde in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten beschrieben, einschließlich krebsassoziierter Veränderungen des Metallstoffwechsels und der Signalübertragung bei oxidativem Stress, was es zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zu Stressantworten und Entgiftungsbiologie macht.
Metallothionein 1F Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MT1F-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MT1F abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MT1F-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MT1F-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.