MEL-1B-R CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401526-ACT

MTNR1B kodiert den humanen Melatoninrezeptor 1B (MEL-1B-R), einen rhodopsinähnlichen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der Melatoninsignale weiterleitet und dadurch die circadiane Zeitgebung sowie die photoperiodenabhängige Physiologie reguliert. Nach Ligandenbindung koppelt der Rezeptor hauptsächlich an Gi/o‑Proteine und moduliert so die Adenylatcyclase‑Aktivität, die cAMP/PKA‑Signalübertragung und nachgeschaltete Transkriptionsprogramme, die zelluläre metabolische Rhythmen koordinieren. Die MTNR1B‑Aktivität steht mit endokriner und metabolischer Regulation in Verbindung, einschließlich der Funktion der Pankreasinseln und der Glukosehomöostase, und ist damit relevant für Studien zur Wechselwirkung zwischen Circadianrhythmik und Stoffwechsel. Genetische und expressionsbezogene Variation in MTNR1B wurde mit veränderten glykämischen Merkmalen und einer erhöhten Anfälligkeit für metabolische Dysfunktionen assoziiert, was seine Bedeutung als mechanistischer Knotenpunkt in der Chronobiologie und kardiometabolischen Forschung unterstreicht.

MEL-1B-R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MTNR1B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MEL-1B-R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MTNR1B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MTNR1B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MEL-1B-R-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MTNR1B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MEL-1B-R-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MEL-1B-R-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MTNR1B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.