Plásmido Doble Nickase (h) MEK-7: sc-402363-NIC

MAP2K7 codifica MEK-7, una quinasa quinasa de MAP quinasas de doble especificidad que fosforila y activa preferentemente isoformas de JNK, conectando diversas señales extracelulares de estrés y citocinas con la reprogramación transcripcional. MEK-7 actúa dentro de la cascada MAPK junto con MAP3K aguas arriba para regular la apoptosis, la señalización inflamatoria y la remodelación del citoesqueleto mediante dianas aguas abajo como c-JUN y factores de transcripción de la familia ATF. La perturbación de la señalización JNK dependiente de MAP2K7 se ha asociado con respuestas inmunitarias alteradas y fenotipos oncogénicos en múltiples contextos tisulares, lo que la convierte en un nodo útil para desentrañar el control de las vías activadas por estrés. Por ello, MEK-7 humana se estudia ampliamente en modelos de inflamación, neurobiología y señalización en células cancerosas, donde la especificidad de la vía y la dinámica de la señalización son fundamentales.

MEK-7 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MAP2K7 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MAP2K7. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MAP2K7. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MAP2K7 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.