MEK-7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402363-ACT

Humanes MAP2K7 kodiert MEK-7, eine dualspezifische MAP-Kinase-Kinase, die bevorzugt JNK (MAPK8/9) phosphoryliert und aktiviert, nachgeschaltet von MAP3Ks wie ASK1 und TAK1. Diese Kinase fungiert als zentraler Knotenpunkt in stressaktivierten Signalwegen, die Transkriptionsprogramme regulieren, welche Apoptose, Zytokinproduktion, Differenzierung und Zytoskelett-Umbau steuern. Die MEK-7-Aktivität integriert entzündliche und oxidative Stresssignale mit AP-1-abhängiger Genexpression und prägt dadurch angeborene Immunantworten sowie die zelluläre Stresstoleranz. Eine Fehlregulation der MAP2K7–JNK-Signalübertragung wurde mit Mechanismen in Verbindung gebracht, die für die Plastizität von Krebszellen, Neuroinflammation und die Biologie metabolischen Stresses relevant sind, was MAP2K7 zu einem nützlichen Ziel für Pathway-Mapping- und Perturbationsstudien macht.

MEK-7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAP2K7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MEK-7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAP2K7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAP2K7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MEK-7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAP2K7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MEK-7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MEK-7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAP2K7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.