Partículas Lentivirales de Activación (h) MEK-5: sc-401688-LAC

MAP2K5 codifica MEK-5, una quinasa MAPK de doble especificidad que actúa aguas arriba de ERK5 (MAPK7) para transmitir señales extracelulares a programas transcripcionales que controlan la proliferación, la diferenciación, la supervivencia y las respuestas al estrés. La activación de MEK-5 integra señales procedentes de factores de crecimiento y del estrés celular para regular efectores nucleares, incluidos los factores de transcripción de la familia MEF2, moldeando así la remodelación del citoesqueleto y fenotipos asociados a la migración. La desregulación del eje MEK5–ERK5 se ha vinculado con señales de crecimiento alteradas y comportamiento invasivo en múltiples contextos patológicos, lo que convierte a MAP2K5 en un objetivo frecuente en estudios de cartografía de vías y genómica funcional. Como quinasa nodal en las cascadas MAPK, MEK-5 ofrece una herramienta manejable para diseccionar la comunicación cruzada de señalización y los cambios posteriores en la expresión génica en células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MEK-5 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de MAP2K5 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MEK-5 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción MAP2K5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MEK-5. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo MAP2K5 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.