Plásmido CRISPR de Activación (h) MEK-2: sc-402732-ACT

MAP2K2 codifica MEK-2, una quinasa MAPK de doble especificidad que fosforila y activa ERK1/2 para propagar la señalización dependiente de mitógenos y de factores de crecimiento. Como nodo central en la cascada RAS–RAF–MEK–ERK, MEK-2 regula la progresión del ciclo celular, la diferenciación, la supervivencia y programas transcripcionales adaptativos, integrando señales de receptores tirosina quinasa y estímulos de estrés. La desregulación de la actividad de MAP2K2/MEK-2 contribuye a una salida anómala de la vía ERK, implicada en señalización oncogénica, trastornos del desarrollo y respuestas inflamatorias alteradas. En sistemas modelo humanos, la modulación de MAP2K2 se utiliza comúnmente para investigar la dinámica de la vía, el control por retroalimentación y la comunicación cruzada con la señalización PI3K/AKT y JNK/p38.

MEK-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAP2K2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MEK-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAP2K2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAP2K2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MEK-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAP2K2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MEK-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MEK-2 en células tumorales con expresión de MAP2K2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.