Plasmide CRISPR/Cas9 KO Med8 (h): sc-404402

Présentation

MED8 code Med8, une sous-unité conservée du complexe Mediator qui fait le lien entre des facteurs de transcription spécifiques de séquence et l’ARN polymérase II afin de coordonner l’initiation et l’élongation de la transcription. Grâce à son rôle dans l’intégrité de Mediator et la communication promoteur–enhancer, MED8 contribue à la régulation de la progression du cycle cellulaire, des programmes de différenciation et de l’expression génique en réponse au stress. La perturbation des composants de Mediator peut reconfigurer des réseaux transcriptionnels qui influencent la stabilité génomique et l’état métabolique, ce qui fait de MED8 une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie du cancer et dans d’autres troubles liés à une dérégulation de la transcription. MED8 humain constitue ainsi un nœud utile pour interroger les voies centrales de contrôle transcriptionnel et les dépendances de régulation génique dépendantes du contexte.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Med8 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MED8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MED8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MED8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Med8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MED8 pour l'étude de la signalisation de Med8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MED8 essentiels à la fonction de Med8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MED8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Med8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Med8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MED8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Med8 plasmide HDR (h) et le Med8 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MED8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MED8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.