Plásmido Doble Nickase (h) Med10: sc-407658-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Med10 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Med10 (h) y el plásmido de doble nickasa Med10 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a MED10. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Med10 Anticuerpo (C-2): sc-393450
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Med10 | sc-407658-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Med10 | sc-407658-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MED10 codifica una subunidad del complejo Mediator, un coordinador central de la transcripción dependiente de la ARN polimerasa II que conecta factores de transcripción específicos de secuencia con la maquinaria transcripcional básica. Med10 contribuye al ensamblaje y la estabilidad de los módulos de Mediator que regulan el inicio de la transcripción y los programas de expresión génica dependientes de señales. A través de estas funciones, MED10 influye en procesos celulares amplios, como la proliferación, la diferenciación y las redes transcripcionales sensibles al estrés. La desregulación de componentes de Mediator se asocia con un control transcripcional alterado en trastornos del desarrollo y con firmas de expresión génica relevantes para el cáncer, lo que convierte a MED10 en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación de la transcripción.
Med10 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MED10 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MED10. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MED10. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MED10 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.