Partículas Lentivirales de Activación (h) MDR3/ABCB4: sc-404167-LAC

ABCB4 (MDR3) codifica un transportador canalicular de hepatocitos de la familia ABC (ATP-binding cassette) que trasloca fosfatidilcolina desde la monocapa interna a la monocapa externa de la membrana canalicular para su secreción a la bilis. Al aportar fosfolípidos que forman micelas mixtas con los ácidos biliares, MDR3 contribuye a la formación de bilis, la protección de la membrana y la homeostasis de lípidos hepatobiliares dentro de las vías de transporte de ácidos biliares y tráfico lipídico. La pérdida o disminución de la actividad de ABCB4 se asocia con fenotipos hepáticos colestásicos y con una composición biliar alterada, por lo que resulta relevante para estudios sobre daño inducido por ácidos biliares, señalización inflamatoria y regulación de redes de transportadores. Por ello, ABCB4 se utiliza ampliamente como modelo para investigar la dinámica de la membrana canalicular y la interacción con otros transportadores hepáticos.

Las partículas de activación lentiviral MDR3/ABCB4 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ABCB4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MDR3/ABCB4 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ABCB4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MDR3/ABCB4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ABCB4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.