Partículas Lentivirales de Activación (h) MDR1/ABCB1: sc-400178-LAC

ABCB1 codifica MDR1/P-glicoproteína (ABCB1), un transportador de eflujo de la familia de cassettes de unión a ATP (ABC) que exporta una amplia gama de xenobióticos y metabolitos endógenos a través de la membrana plasmática. Al regular la acumulación intracelular de fármacos y la desintoxicación celular, MDR1 influye en la farmacocinética y en las funciones de barrera en tejidos como el intestino, el hígado, el riñón y la barrera hematoencefálica. La actividad de ABCB1 se interrelaciona con las redes de respuesta al estrés celular y de transporte de membrana, modulando la exposición a compuestos citotóxicos y contribuyendo a fenotipos de resistencia a múltiples fármacos. La expresión desregulada de ABCB1 se ha asociado con una disposición alterada de fármacos y con quimiorresistencia en diversos modelos tumorales, lo que lo convierte en un objetivo clave para estudios de biología de transportadores y mecanismos de resistencia.

Las partículas de activación lentiviral MDR1/ABCB1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ABCB1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MDR1/ABCB1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ABCB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MDR1/ABCB1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ABCB1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.