Plasmide CRISPR d'Activation (h) MDR1/ABCB1: sc-400178-ACT

ABCB1 (MDR1/P‑glycoprotéine) est un transporteur de la famille des « ATP‑binding cassette » qui expulse, à travers la membrane plasmique, une vaste gamme de xénobiotiques et de métabolites endogènes, modulant ainsi l’accumulation intracellulaire des médicaments et la fonction de barrière. Il est fortement exprimé dans les tissus épithéliaux et endothéliaux, notamment l’intestin, le foie, le rein et la barrière hémato‑encéphalique, où il contribue à la détoxification et à la protection des tissus. L’activité de MDR1/ABCB1 s’inscrit dans des processus pharmacocinétiques et de réponse au stress en limitant l’exposition aux composés cytotoxiques et en influençant l’homéostasie cellulaire. Une expression dérégulée d’ABCB1 a été largement associée à des phénotypes de résistance multidrogue dans des modèles de cancer, ainsi qu’à une variabilité de la réponse aux traitements dans des contextes de maladies neurologiques et inflammatoires.

MDR1/ABCB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ABCB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MDR1/ABCB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ABCB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ABCB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MDR1/ABCB1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ABCB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MDR1/ABCB1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MDR1/ABCB1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ABCB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.