Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MDH2 Double Nickase Plasmid (h): sc-402825-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MDH2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MDH2 Double-Nickase-Plasmid (h) und MDH2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MDH2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MDH2: sc-293474
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MDH2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402825-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MDH2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402825-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MDH2 kodiert die mitochondriale Malatdehydrogenase, ein NAD-abhängiges Enzym, das die reversible Umwandlung von Malat zu Oxalacetat katalysiert und damit den Tricarbonsäurezyklus (TCA-Zyklus) sowie die mitochondriale Redoxhomöostase unterstützt. Über seine Rolle im oxidativen Stoffwechsel trägt MDH2 zur ATP-Produktion, zum NADH/NAD⁺-Gleichgewicht und zu anaplerotischen Flüssen bei, die die mitochondriale Funktion mit dem übergeordneten Kohlenstoffmetabolismus verknüpfen. Eine Störung der MDH2-Aktivität kann die respiratorische Kapazität und metabolische Signalwege verändern – Prozesse, die häufig in Studien zum Tumorstoffwechsel, zu mitochondrialen Erkrankungen und zur Neurodegeneration untersucht werden. Als zentrales Enzym der mitochondrialen Matrix ist MDH2 zudem relevant für die Erforschung metabolischer Anpassungen an Hypoxie, Nährstoffstress und der Dynamik reaktiver Sauerstoffspezies.
MDH2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MDH2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MDH2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MDH2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MDH2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.