MDC Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422840

Descripción general

Ccl22 codifica la quimiocina conocida como quimiocina derivada de macrófagos (MDC), un ligando de CCR4 que promueve la migración dirigida de células inmunitarias, en particular de células T CD4+ polarizadas hacia Th2, células T reguladoras y otros leucocitos que expresan CCR4. La MDC es producida por macrófagos, células dendríticas y otras poblaciones estromales/inmunitarias en respuesta a señales inflamatorias, modulando el tráfico leucocitario, las respuestas impulsadas por antígenos y la composición inmunitaria de los tejidos. A través de la señalización del receptor de quimiocinas, que activa vías dependientes de GPCR como PI3K–AKT y MAPK y modula la dinámica del citoesqueleto, Ccl22 contribuye a la homeostasis inmunitaria y a los microambientes inflamatorios locales. La desregulación de la señalización Ccl22/MDC se ha asociado con patrones alterados de reclutamiento de células T, relevantes para la inflamación alérgica, la autoinmunidad y las interacciones tumor-inmunidad en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MDC (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ccl22 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ccl22 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ccl22 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MDC.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ccl22 para la investigación de la señalización de MDC, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ccl22 críticos para la función de MDC
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ccl22 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MDC CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MDC CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ccl22. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MDC (m) y el plásmido HDR MDC (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ccl22 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ccl22 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.