Plasmide CRISPR d'Activation (m) MCPIP: sc-432978-ACT

La protéine MCPIP (également appelée Regnase-1) est codée chez la souris par Zc3h12a. Il s’agit d’une RNase et d’une déubiquitinase qui limite l’expression des gènes inflammatoires en favorisant la dégradation des ARNm de cytokines et de chimiokines. MCPIP agit à l’interface de la signalisation de l’immunité innée, en régulant les sorties des voies NF-κB et MAPK et en modulant les états d’activation des macrophages et des lymphocytes T. En limitant l’ampleur et la durée des réponses immunitaires, Zc3h12a contribue à l’homéostasie inflammatoire et a été impliqué dans des modèles d’auto-immunité, d’inflammation tissulaire et de pathologies à médiation immunitaire. Ses activités de liaison à l’ARN et d’édition de l’ubiquitine relient également le contrôle post-transcriptionnel à des programmes de stress et de différenciation pertinents pour la recherche en immunologie et en biologie du cancer.

MCPIP Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Zc3h12a sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MCPIP Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Zc3h12a dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Zc3h12a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MCPIP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Zc3h12a natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MCPIP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MCPIP dans les cellules tumorales présentant une expression de Zc3h12a silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.