MCM8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-413655

Descripción general

MCM8 codifica una proteína conservada de mantenimiento de minicro-mosomas que forma un complejo funcional con MCM9 para favorecer la finalización de la replicación del ADN y la reparación mediada por recombinación homóloga, en particular durante la recuperación del estrés replicativo. MCM8 contribuye a la resección de los extremos del ADN y al procesamiento de horquillas de replicación detenidas o colapsadas, lo que la vincula al mantenimiento de la estabilidad del genoma tanto a lo largo de la fase S como en contextos de recombinación meiótica. La alteración de la función de MCM8 se ha asociado con una reparación deficiente de roturas de doble cadena, un aumento de la inestabilidad cromosómica y una mayor susceptibilidad al daño del ADN asociado a la replicación. Se han descrito alteraciones genéticas en MCM8 en infertilidad e insuficiencia ovárica prematura, y también son relevantes para estudios mecanísticos de la tumorigenesis impulsada por vías de reparación del ADN defectuosas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MCM8 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MCM8 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MCM8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MCM8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MCM8.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MCM8 para la investigación de la señalización de MCM8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MCM8 críticos para la función de MCM8
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MCM8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MCM8 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MCM8 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MCM8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MCM8 (h) y el plásmido HDR MCM8 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MCM8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MCM8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.