Plásmido Doble Nickase (h) MCM4: sc-402451-NIC

MCM4 codifica una subunidad central del complejo helicasa de mantenimiento de minicro­mosomas (MCM2–7), que concede licencia a los orígenes de replicación e impulsa el desenrollamiento del ADN durante la fase S. Mediante su regulación por las vías de señalización de CDK y DDK, MCM4 participa en el inicio y la elongación de la replicación, coordina el avance de la horquilla de replicación y favorece la estabilidad del genoma bajo estrés replicativo. La alteración de la función de MCM4 desorganiza la temporización de la replicación del ADN y activa vías de control como ATR–CHK1, lo que vincula a MCM4 con mecanismos que protegen frente a la acumulación de daño en el ADN. La expresión alterada o la disfunción de MCM4 se ha asociado con fenotipos proliferativos e inestabilidad genómica relevantes para la biología del cáncer y para trastornos hereditarios de la replicación y reparación del ADN.

MCM4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MCM4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MCM4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MCM4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MCM4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.