MCM4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402451-ACT

Humanes **MCM4** kodiert eine zentrale Untereinheit des **MCM2–7-Helikasekomplexes**, der Replikationsursprünge lizenziert und während der S‑Phase das Entwinden der DNA‑Doppelhelix antreibt. Durch die Koordination von Origin-Firing, Replikationsgabel-Progression und Replikations-Checkpoint-Antworten trägt MCM4 zur **Genomstabilität** innerhalb der Signalwege der DNA-Replikation und der DNA-Schadensantwort bei. Eine Störung der MCM4-Aktivität kann **Replikationsstress**, Kollaps von Replikationsgabeln und die Anhäufung von **DNA-Läsionen** fördern – Prozesse, die mit der in der Krebsbiologie und anderen proliferativen Erkrankungen beobachteten **chromosomalen Instabilität** verknüpft sind. Entsprechend wird MCM4 häufig als mechanistischer Knotenpunkt genutzt, um Zellzyklus-Kontrolle, Replikationsstress-Signalgebung und das Zusammenspiel von DNA-Reparaturwegen zu untersuchen.

MCM4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MCM4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MCM4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MCM4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MCM4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MCM4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MCM4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MCM4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MCM4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MCM4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.