Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MCM3 Double Nickase Plasmid (h): sc-402076-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MCM3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MCM3 Double-Nickase-Plasmid (h) und MCM3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MCM3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MCM3: sc-390480
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MCM3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402076-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MCM3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402076-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MCM3 kodiert die Minichromosomen-Erhaltungs-Komplexkomponente 3, eine zentrale Untereinheit der MCM2–7-Helikase, die für die Lizenzierung von Replikationsursprüngen (Origin Licensing) und das Voranschreiten der DNA-Replikationsgabel während der S‑Phase erforderlich ist. Als Teil des Prä-Replikationskomplexes koordiniert MCM3 mit CDC45 und GINS, um den Aufbau des Replisoms voranzutreiben und damit die Genomstabilität sowie eine zuverlässige Chromosomenverdopplung zu gewährleisten. Störungen der MCM3-abhängigen Replikationsdynamik können Replikationsstress, veränderte Zellzyklus-Checkpoints und die Anhäufung von DNA-Schäden begünstigen – Prozesse, die häufig im Kontext der Krebsbiologie und proliferativer Erkrankungen untersucht werden. MCM3 wird daher vielfach als mechanistischer Ansatzpunkt genutzt, um die Kontrolle der DNA-Replikation, Replikationsstressantworten und die Zellzyklusregulation zu untersuchen.
MCM3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MCM3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MCM3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MCM3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MCM3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.