Plasmide Double Nickase (h) MCM2: sc-400959-NIC

MCM2 code une sous-unité essentielle du complexe hélicase de maintenance des minichromosomes (MCM2–7), qui autorise les origines de réplication de l’ADN et assure la progression de la fourche de réplication pendant la phase S. Par une action coordonnée avec CDC45 et le complexe GINS, MCM2 contribue à l’assemblage du replisome, aux réponses au stress réplicatif et au couplage de la synthèse d’ADN avec la signalisation des points de contrôle. Une perturbation ou une expression dérégulée de MCM2 peut compromettre la stabilité du génome, accroître le stress de réplication et modifier les programmes de contrôle du cycle cellulaire, fréquemment étudiés dans les troubles prolifératifs. En tant que marqueur des cellules en cycle, MCM2 est largement utilisé pour analyser la dynamique de la réplication, les états d’autorisation liés à la chromatine et les mécanismes de tolérance aux dommages de l’ADN.

MCM2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MCM2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MCM2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MCM2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MCM2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.