MCM2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400959

Descripción general

MCM2 (componente 2 del complejo de mantenimiento de minicromosomas) es una ATPasa AAA+ esencial dentro de la helicasa MCM2–7, que autoriza (licencia) los orígenes de replicación e impulsa el desenrollamiento del ADN durante la fase S. Al coordinar la activación de los orígenes, la progresión de la horquilla de replicación y las respuestas de los puntos de control, MCM2 ayuda a mantener la estabilidad del genoma y favorece un tránsito ordenado del ciclo celular a través del límite G1/S. La expresión desregulada de MCM2 o la licencia de replicación puede contribuir al estrés replicativo, a la señalización de daño en el ADN y a la inestabilidad cromosómica, procesos que se investigan con frecuencia en biología del cáncer y en trastornos proliferativos. Como factor central del replisoma, MCM2 también se estudia en el contexto de las vías de estrés replicativo dependientes de ATR/CHK1 y de las respuestas a perturbaciones genotóxicas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MCM2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MCM2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MCM2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MCM2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MCM2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MCM2 para la investigación de la señalización de MCM2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MCM2 críticos para la función de MCM2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MCM2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MCM2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MCM2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MCM2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MCM2 (h) y el plásmido HDR MCM2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MCM2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MCM2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.