MCAT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404338

Descripción general

MCAT (transacilasa malonil‑CoA:ACP) es una enzima mitocondrial necesaria para la síntesis mitocondrial de ácidos grasos (mtFAS), ya que transfiere grupos malonilo a la proteína transportadora de acilos, lo que permite la elongación de cadenas acilo utilizadas en la producción de ácido lipoico. A través de su papel en la generación de lipoato, MCAT favorece la lipoilación de complejos deshidrogenasa clave como la piruvato deshidrogenasa y la α‑cetoglutarato deshidrogenasa, conectando la mtFAS con el metabolismo central del carbono, la homeostasis redox y el flujo energético mitocondrial. La alteración de la actividad de MCAT puede influir en la respiración mitocondrial y en la utilización de metabolitos, con efectos posteriores sobre el estrés oxidativo y la reprogramación metabólica. Estos procesos son relevantes para estudios mecanísticos de la disfunción mitocondrial y de la biología de enfermedades asociadas al metabolismo, incluidos contextos en los que se altera el estado de lipoilación y la función de enzimas vinculadas al ciclo del TCA.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MCAT (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MCAT en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MCAT junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MCAT tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MCAT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MCAT para la investigación de la señalización de MCAT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MCAT críticos para la función de MCAT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MCAT para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MCAT CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MCAT CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MCAT. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MCAT (h) y el plásmido HDR MCAT (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MCAT para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MCAT definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.