MaxiKβ Double Nickase Plasmid (h): sc-403096-NIC

KCNMB1 kodiert die β1‑regulatorische Untereinheit des großleitenden, calcium- und spannungsaktivierten Kaliumkanals (BK/MaxiK), die die Kanalöffnung moduliert, indem sie die scheinbare Ca²⁺‑Empfindlichkeit erhöht und die Repolarisation der Membran mitprägt. In humaner glatter Muskulatur und anderen erregbaren Geweben koppelt MaxiKβ1 intrazelluläre Ca²⁺‑Signale an den Kaliumausstrom und beeinflusst so über eine Rückkopplungsregulation des Membranpotentials den Gefäßtonus, die Kontraktilität der Atemwege und die neuronale Erregungsaktivität. Diese modulierende Funktion verknüpft KCNMB1 mit Ca²⁺‑abhängiger Signalübertragung, elektromechanischer Kopplung sowie NO/cGMP‑responsiven Signalwegen, die in der Kontrolle von Ionenkanälen zusammenlaufen. Veränderte Funktionen der BK‑Kanal‑β1‑Untereinheit wurden im Zusammenhang mit der Blutdruckregulation, einer Hyperreaktivität glatter Muskulatur und Erregbarkeitsstörungen untersucht, wodurch KCNMB1 ein nützliches Ziel für mechanistische Ionenkanalforschung ist.

MaxiKβ Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KCNMB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KCNMB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KCNMB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KCNMB1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.