Plásmido Doble Nickase (h) MaxiKβ: sc-403096-NIC

KCNMB1 codifica la subunidad reguladora β1 del canal de potasio de gran conductancia activado por calcio y voltaje (BK/MaxiK), que ajusta la compuerta del canal al aumentar la sensibilidad aparente al Ca²⁺ y modelar la repolarización de la membrana. En el músculo liso humano y otros tejidos excitables, MaxiKβ1 acopla las señales intracelulares de Ca²⁺ al eflujo de potasio, influyendo en el tono vascular, la contractilidad de las vías aéreas y la descarga neuronal mediante la regulación por retroalimentación del potencial de membrana. Esta función moduladora vincula a KCNMB1 con la señalización dependiente de Ca²⁺, el acoplamiento electromecánico y las vías sensibles al óxido nítrico/cGMP que convergen en el control de canales iónicos. La alteración de la función de la subunidad β1 del canal BK se ha investigado en el contexto de la regulación de la presión arterial, la hiperreactividad del músculo liso y trastornos de la excitabilidad, lo que convierte a KCNMB1 en una diana útil para la investigación mecanística de canales iónicos.

MaxiKβ El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KCNMB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KCNMB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KCNMB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KCNMB1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.