MaxiKβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403096

Übersicht

KCNMB1 kodiert die β1‑regulatorische Untereinheit großleitender, Ca²⁺‑ und spannungsaktivierter Kaliumkanäle (BK/MaxiK), die häufig als MaxiKβ bezeichnet wird. Durch die Erhöhung der Ca²⁺‑Empfindlichkeit der BK‑Kanäle und die Veränderung der Gating‑Kinetik prägt MaxiKβ die Membranerregbarkeit, die intrazelluläre Ca²⁺‑Dynamik und den Tonus glatter Muskulatur. Diese modulierende Aktivität ist in Signalwege eingebunden, die die vaskuläre Reaktivität, die Kontraktilität der Atemwege und die renale Elektrolythandhabung steuern, mit nachgeschalteten Effekten auf NO/cGMP‑gekoppelte Signalübertragung und Ca²⁺‑abhängige Prozesse. Eine veränderte Funktion oder Expression von KCNMB1 wurde mit einer dysregulierten Blutdruckkontrolle, Phänotypen glatter Muskel‑Hyperkontraktilität und weiteren erregbarkeitsassoziierten Erkrankungen in Verbindung gebracht.

Das MaxiKβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KCNMB1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KCNMB1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KCNMB1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MaxiKβ-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KCNMB1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MaxiKβ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KCNMB1-Exone abzielen, die für die MaxiKβ-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KCNMB1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MaxiKβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MaxiKβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KCNMB1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MaxiKβ HDR-Plasmid (h) und MaxiKβ HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KCNMB1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KCNMB1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.