Plásmido Doble Nickase (h) MaxiKα: sc-402208-NIC

KCNMA1 codifica la subunidad α del canal de potasio humano MaxiKα (BK, KCa1.1), un canal de gran conductancia activado por voltaje y por Ca2+, y un regulador central de la excitabilidad de la membrana y de la señalización intracelular del calcio. Al acoplar los aumentos de Ca2+ citosólico y la despolarización al eflujo de K+, MaxiKα modula la repolarización del potencial de acción, la liberación de neurotransmisores, el tono del músculo liso y la mecanotransducción en muchos tipos celulares. La función del canal se integra con vías de señalización mediadas por GPCR y quinasas, y está fuertemente modulada por subunidades auxiliares β/γ y por microdominios locales de Ca2+. La desregulación de la actividad de KCNMA1 o alteraciones en la compuerta del canal se han vinculado a fenotipos neurológicos, incluida la epilepsia y los trastornos del movimiento, y a cambios funcionales en la fisiología vascular y de las vías respiratorias relevantes para la investigación cardiopulmonar.

MaxiKα El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KCNMA1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KCNMA1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KCNMA1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KCNMA1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.