Plasmide CRISPR d'Activation (h) Matrilin-2: sc-404852-ACT

MATN2 code la matriline‑2, une protéine adaptatrice modulaire de la matrice extracellulaire (MEC) qui contribue à organiser les réseaux matriciels en reliant les collagènes, les protéoglycanes et d’autres glycoprotéines dans les tissus conjonctifs. La matriline‑2 soutient l’adhésion cellule–matrice, l’architecture tissulaire et les processus de remodelage de la MEC qui influencent la migration cellulaire, la mécanotransduction et la différenciation. Une expression altérée de MATN2 a été rapportée dans des contextes de dépôt matriciel aberrant et de remodelage chronique, notamment dans des microenvironnements fibrosants et inflammatoires, et peut affecter la signalisation stroma–épithélium. En tant que facteur associé à la matrice, la matriline‑2 est pertinente pour l’étude de l’assemblage de la MEC, des programmes de type cicatrisation et de la régulation, par le microenvironnement, du phénotype cellulaire.

Matrilin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MATN2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Matrilin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MATN2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MATN2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Matrilin-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MATN2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Matrilin-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Matrilin-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de MATN2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.