MATH-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419231

Panoramica

Neurod6 codifica il fattore di trascrizione basic helix–loop–helix MATH-2, un regolatore chiave della differenziazione, maturazione e sopravvivenza neuronale nel sistema nervoso in sviluppo del topo. MATH-2 influenza programmi genici che supportano l’estensione dei neuriti, la guida assonale e il mantenimento dell’identità neuronale glutammatergica, coordinandosi con altri fattori proneurali bHLH per modellare i circuiti corticali e ippocampali. Attraverso il controllo trascrizionale del destino e della connettività neuronale, Neurod6 è rilevante per studi sui meccanismi del neurosviluppo e sulle vie implicate in fenotipi cognitivi e comportamentali. Le reti di differenziazione guidate da bHLH e la loro disregolazione sono comunemente analizzate in modelli di disturbi del neurosviluppo e di vulnerabilità neuronale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MATH-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Neurod6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Neurod6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Neurod6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MATH-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Neurod6 per lo studio della segnalazione di MATH-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Neurod6 critici per la funzione di MATH-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Neurod6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MATH-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MATH-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Neurod6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MATH-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MATH-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Neurod6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Neurod6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.