Plasmide CRISPR/Cas9 KO MAT Iα (m): sc-419102

Présentation

Mat1a code la méthionine adénosyltransférase I alpha (MAT Iα), la principale enzyme hépatique qui catalyse la synthèse de la S-adénosyl-L-méthionine (SAM), le principal donneur de méthyle pour les réactions de méthylation de l’ADN, de l’ARN, des protéines et des lipides. En contrôlant l’équilibre SAM/SAH, MAT Iα relie le métabolisme de la méthionine au métabolisme à un carbone, à la transsulfuration et à l’homéostasie rédox, influençant la régulation épigénétique et la capacité globale de méthylation. Une activité altérée de MAT1A est associée à une perturbation des programmes d’expression génique dépendants de la méthylation et des réponses au stress métabolique, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la physiologie hépatique, de la différenciation des hépatocytes et des mécanismes de dysfonctionnement métabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MAT Iα (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mat1a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mat1a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mat1a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MAT Iα.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mat1a pour l'étude de la signalisation de MAT Iα, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Mat1a essentiels à la fonction de MAT Iα
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mat1a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MAT Iα plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MAT Iα plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mat1a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MAT Iα plasmide HDR (m) et le MAT Iα (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mat1a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mat1a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.