Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mast Cell Tryptase: sc-400887-ACT

TPSAB1 code la tryptase des mastocytes (tryptase-α/β), une protéase à sérine sécrétée, stockée dans les granules des mastocytes et libérée lors de la dégranulation. La tryptase mastocytaire participe au remodelage protéolytique de la matrice extracellulaire et peut signaler via des récepteurs activés par les protéases, modulant les cascades inflammatoires, le recrutement des leucocytes et la perméabilité vasculaire. En influençant les réseaux de cytokines et la dynamique du microenvironnement tissulaire, TPSAB1 est couramment utilisé comme marqueur de l’activation et de l’abondance des mastocytes en immunologie et en biologie des tissus barrières. Les altérations de l’activité de la tryptase mastocytaire et les profils d’infiltration des mastocytes sont étudiés dans les allergies, l’asthme, les maladies inflammatoires chroniques, les processus associés à la fibrose et l’inflammation associée aux tumeurs.

Mast Cell Tryptase Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TPSAB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mast Cell Tryptase Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TPSAB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TPSAB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mast Cell Tryptase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TPSAB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mast Cell Tryptase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mast Cell Tryptase dans les cellules tumorales présentant une expression de TPSAB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.