Plásmido CRISPR de Activación (h) Mast Cell Tryptase: sc-400887-ACT

TPSAB1 codifica la triptasa de los mastocitos (triptasa-α/β), una proteasa serina secretada que se almacena en los gránulos de los mastocitos y se libera durante la degranulación. La triptasa mastocitaria participa en la remodelación proteolítica de la matriz extracelular y puede señalizar a través de receptores activados por proteasas, modulando las cascadas inflamatorias, el reclutamiento de leucocitos y la permeabilidad vascular. Al influir en las redes de citocinas y en la dinámica del microambiente tisular, TPSAB1 se utiliza habitualmente como marcador de activación y abundancia de mastocitos en inmunología y en la biología de tejidos barrera. La actividad alterada de la triptasa mastocitaria y los patrones de infiltración de mastocitos se estudian en alergia, asma, trastornos inflamatorios crónicos, procesos asociados a fibrosis e inflamación asociada a tumores.

Mast Cell Tryptase El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TPSAB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Mast Cell Tryptase El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TPSAB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TPSAB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Mast Cell Tryptase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TPSAB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Mast Cell Tryptase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Mast Cell Tryptase en células tumorales con expresión de TPSAB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.