Plásmido Doble Nickase (h) Mast Cell Chymase: sc-403686-NIC

CMA1 codifica la quimasa de los mastocitos, una proteasa de serina asociada a los gránulos que se libera durante la desgranulación mastocitaria y que modula las respuestas inflamatorias y de remodelación tisular. La quimasa humana contribuye al recambio de la matriz extracelular y a la señalización local al procesar diversos sustratos, entre ellos péptidos vasoactivos y precursores de citocinas, influyendo así en vías activadas por proteasas y relacionadas con el sistema renina–angiotensina en el microambiente perivascular. La actividad desregulada de la quimasa se ha vinculado con la inflamación alérgica y con procesos crónicos de remodelación fibrótica, en los que las proteasas derivadas de mastocitos modulan el reclutamiento de leucocitos, la permeabilidad vascular y la activación de células del estroma. Por ello, CMA1 se estudia con frecuencia en biología de las vías respiratorias y cardiovascular, en redes de señalización fibroinflamatoria y en mecanismos de patología impulsada por mastocitos.

Mast Cell Chymase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CMA1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CMA1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CMA1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CMA1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.