Plásmido CRISPR de Activación (h) Mast Cell Chymase: sc-403686-ACT

CMA1 codifica la quimasa de los mastocitos, una serinproteasa secretada de tipo quimotripsina que se almacena en los gránulos de los mastocitos y se libera durante la degranulación. La quimasa participa en la remodelación de la matriz extracelular y en el procesamiento de péptidos bioactivos, influyendo en la señalización inflamatoria local y en el tono vascular dentro de los microambientes tisulares. Su actividad se integra con vías impulsadas por mastocitos que involucran receptores activados por proteasas, redes de citocinas/quimiocinas y programas de remodelación asociados a la fibrosis. La desregulación de la expresión de CMA1 o de la actividad de la quimasa se ha vinculado con la inflamación alérgica, el asma, la remodelación cardiovascular y trastornos fibróticos de la piel y el pulmón, lo que la convierte en una herramienta molecular útil para estudios mecanísticos de la biología de los mastocitos.

Mast Cell Chymase El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CMA1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Mast Cell Chymase El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CMA1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CMA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Mast Cell Chymase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CMA1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Mast Cell Chymase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Mast Cell Chymase en células tumorales con expresión de CMA1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.