MASP-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402549-ACT

MASP2 codifica la proteasi serinica 2 legante la lectina del mannosio (MASP-2), una proteasi di origine epatica che avvia la via lectinica del complemento dopo il legame di molecole di riconoscimento del pattern, come MBL e le ficoline, ai glicani microbici o a superfici self alterate. Una volta attivata, MASP-2 scinde C4 e C2 generando la convertasi di C3, amplificando l’opsonizzazione, l’infiammazione e la successiva formazione del complesso di attacco alla membrana nell’ambito della sorveglianza immunitaria innata. Questa via interagisce con la coagulazione e con la segnalazione infiammatoria attraverso frammenti effettrici del complemento e regolatori che modulano il reclutamento dei leucociti e le risposte di danno tissutale. Un’alterata attività di MASP2 o variazioni genetiche sono state associate a una maggiore suscettibilità alle infezioni e a stati infiammatori immunomediati, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici della patologia guidata dal complemento.

MASP-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MASP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MASP-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MASP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MASP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MASP-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MASP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MASP-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MASP-2 nelle cellule tumorali con espressione di MASP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.