MASP-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403583-ACT

MASP1 kodiert die Mannan-bindende Lektin-Serinprotease 1 (MASP-1), eine zentrale Initiatorprotease des Lektinwegs des Komplementsystems. Nach der Erkennung mikrobieller Kohlenhydrate durch Mustererkennungs-Moleküle wie MBL und Ficoline fördert MASP-1 proteolytische Aktivierungsereignisse, die die Komplementsignalkaskade verstärken und Schnittstellen zu Gerinnungs- und Entzündungskaskaden bilden. Durch die Spaltung nachgeschalteter Substrate sowie die Modulation endothelialer und leukozytärer Antworten hilft MASP-1, die angeborene Immunabwehr und die Gewebeüberwachung zu koordinieren. Eine fehlregulierte Aktivität des Lektinwegs und eine veränderte MASP1-Expression wurden mit entzündlicher und vaskulärer Pathobiologie in Verbindung gebracht und bieten damit einen mechanistischen Ansatzpunkt zur Untersuchung komplementgetriebener Krankheitsprozesse in humanen Systemen.

MASP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MASP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MASP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MASP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MASP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MASP-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MASP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MASP-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MASP-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MASP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.