Plasmide CRISPR/Cas9 KO MASP-1/3 (m): sc-421564

Présentation

Masp1 code les sérine-protéases associées à la lectine liant le mannose MASP‑1 et MASP‑3, des enzymes sécrétées qui participent à l’immunité innée en régulant la voie des lectines du complément. Par le clivage des composants du complément et la coordination avec des molécules de reconnaissance des motifs telles que la MBL et les ficolines, MASP‑1/3 influence l’opsonisation, la signalisation inflammatoire et les interactions entre le complément et des processus liés à la coagulation. MASP‑3 est en outre impliquée dans le contrôle de la voie alterne via l’activation du facteur D, plaçant Masp1 à une intersection clé de l’amplification du complément. Une activation dérégulée du complément et une activité altérée de MASP‑1/3 ont été associées à des phénotypes inflammatoires et auto-immuns, et contribuent à des mécanismes de lésions tissulaires pertinents pour la maladie dans de nombreux systèmes d’organes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MASP-1/3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Masp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Masp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Masp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MASP-1/3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Masp1 pour l'étude de la signalisation de MASP-1/3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Masp1 essentiels à la fonction de MASP-1/3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Masp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MASP-1/3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MASP-1/3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Masp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MASP-1/3 plasmide HDR (m) et le MASP-1/3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Masp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Masp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.