Plásmido CRISPR de Activación (h) MARCKSL1: sc-403985-ACT

MARCKSL1 (MARCKS-like 1) codifica una proteína asociada a la membrana que se une a la actina y regula la remodelación del citoesqueleto, la polaridad celular y la motilidad mediante interacciones dependientes de fosforilación con fosfolípidos y con la F-actina. Como efector aguas abajo de la señalización de PKC, MARCKSL1 participa en vías que coordinan el crecimiento de neuritas, la dinámica de los lamelipodios y el tráfico vesicular, conectando señales extracelulares con cambios en la forma celular. La alteración de la expresión de MARCKSL1 se ha asociado con fenotipos invasivos y la progresión metastásica en múltiples contextos tumorales, en consonancia con su papel en la migración y la adhesión. Estas propiedades hacen de MARCKSL1 una diana útil para estudiar mecanismos impulsados por el citoesqueleto que subyacen al desarrollo, a respuestas tipo “cicatrización” y a la diseminación de células cancerosas.

MARCKSL1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MARCKSL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MARCKSL1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MARCKSL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MARCKSL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MARCKSL1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MARCKSL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MARCKSL1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MARCKSL1 en células tumorales con expresión de MARCKSL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.