MARCH8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405928

Übersicht

MARCH8 (membranassoziierte Ring-CH-Typ-Finger-8) kodiert eine E3-Ubiquitin-Ligase, die in endosomalen Kompartimenten und an der Plasmamembran lokalisiert ist und den ubiquitinierungsabhängigen Abbau sowie das Trafficking zahlreicher Membranproteine reguliert. Durch die Kontrolle von Endozytose, lysosomaler Sortierung und der Verfügbarkeit von Rezeptoren und Transportern an der Zelloberfläche beeinflusst MARCH8 die Antigenpräsentation, die Immun-Signalübertragung und Qualitätskontrollwege für Membranproteine. Seine Aktivität wird mit der Modulation des Einbaus viraler Hüllglykoproteine und der Einschränkung der Infektiosität viraler Partikel in Verbindung gebracht, was seine Rolle an der Schnittstelle von Wirtsabwehr und Membranbiologie unterstreicht. Fehlregulierte, ubiquitinvermittelte Trafficking-Programme unter Beteiligung von MARCH8 sind für Studien zu Immundysfunktionen und Pathogen-Wirt-Interaktionen in menschlichen Zellen relevant.

Das MARCH8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MARCH8-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MARCH8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MARCH8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MARCH8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MARCH8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MARCH8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MARCH8-Exone abzielen, die für die MARCH8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MARCH8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MARCH8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MARCH8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MARCH8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MARCH8 HDR-Plasmid (h) und MARCH8 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MARCH8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MARCH8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.