MARCH8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405928

Descripción general

MARCH8 (dedo tipo anillo asociado a membrana, tipo CH, 8) codifica una ligasa E3 de ubiquitina que se localiza en compartimentos endosomales y de la membrana plasmática, y regula la degradación y el tráfico dependientes de la ubiquitinación de múltiples proteínas de membrana. Al controlar la endocitosis, el direccionamiento lisosomal y la disponibilidad en superficie de receptores y transportadores, MARCH8 influye en la presentación de antígenos, la señalización inmunitaria y las vías de control de calidad de proteínas de membrana. Su actividad se ha vinculado con la modulación de la incorporación de glicoproteínas de la envoltura viral y con la restricción de la infectividad de las partículas virales, lo que pone de relieve funciones en la interfaz entre la defensa del hospedador y la biología de membranas. Los programas de tráfico mediado por ubiquitina desregulados en los que participa MARCH8 son relevantes para estudios de disfunción inmunitaria e interacciones patógeno–hospedador en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MARCH8 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MARCH8 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MARCH8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MARCH8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MARCH8.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MARCH8 para la investigación de la señalización de MARCH8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MARCH8 críticos para la función de MARCH8
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MARCH8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MARCH8 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MARCH8 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MARCH8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MARCH8 (h) y el plásmido HDR MARCH8 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MARCH8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MARCH8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.