MARCH5 Double Nickase Plasmid (h): sc-404655-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MARCH5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MARCH5 Double-Nickase-Plasmid (h) und MARCH5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MARCH5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MARCH5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404655-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MARCH5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404655-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MARCH5 (auch als MITOL bekannt) ist eine RING-Typ-E3-Ubiquitin-Ligase der äußeren Mitochondrienmembran, die die Qualitätskontrolle mitochondrialer Proteine und die Dynamik des Organells reguliert. Durch die Ubiquitinierung von Substraten, die an der Balance zwischen mitochondrialer Fusion und Spaltung sowie an der Stresssignalübertragung beteiligt sind, beeinflusst MARCH5 Prozesse wie Mitophagie, Apoptose und die integrierte zelluläre Antwort auf mitochondriale Dysfunktion. Es ist an Schnittstellen zu Ubiquitin-Proteasom-Wegen und Netzwerken der mitochondrialen Homöostase beteiligt, die das Redox-Gleichgewicht und die bioenergetische Anpassung prägen. In der Literatur wurde eine fehlregulierte MARCH5-Aktivität oder -Expression mit veränderter mitochondrialer Morphologie und erhöhter Stressanfälligkeit in Zusammenhängen in Verbindung gebracht, die für Neurodegeneration und den Stoffwechsel von Krebszellen relevant sind.
MARCH5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MARCH5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MARCH5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MARCH5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MARCH5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.