Plásmido CRISPR de Activación (h) MAP-1A: sc-403259-ACT

MAP1A codifica la proteína asociada a microtúbulos 1A (MAP-1A), un andamiaje citoesquelético de alto peso molecular que estabiliza los microtúbulos y ayuda a organizar la arquitectura axonal en neuronas diferenciadas. Al conectar los microtúbulos con complejos asociados a actina y adaptadores de carga, MAP-1A favorece la extensión de neuritas, el transporte intracelular y el mantenimiento sináptico, procesos centrales para la polaridad neuronal y la conectividad de la red. La regulación alterada de la dinámica de los microtúbulos y del transporte axonal es una característica recurrente en la biología de enfermedades del neurodesarrollo y neurodegenerativas, lo que convierte a MAP1A en un nodo relevante para estudios mecanísticos de disfunción del citoesqueleto. Por ello, la expresión de MAP1A y la remodelación del citoesqueleto dependiente de MAP-1A se analizan con frecuencia en modelos de maduración neuronal, respuestas al estrés y proteostasis.

MAP-1A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAP1A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MAP-1A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAP1A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAP1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MAP-1A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAP1A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MAP-1A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MAP-1A en células tumorales con expresión de MAP1A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.