MALL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406302

Übersicht

MAL-like (MALL) kodiert ein Tetraspan-Membranprotein, das in cholesterin- und sphingolipidreichen Membranmikrodomänen angereichert ist und dort zur Organisation des apikalen Traffickings sowie der Kompartimentierung von Membranen in Epithelzellen beiträgt. Über seine Auswirkungen auf die Architektur von Lipid Rafts kann MALL das endozytotische Recycling, den vesikulären Transport und die räumliche Verteilung von Signalkomplexen an der Plasmamembran beeinflussen. Eine veränderte MALL-Expression wurde in mehreren Tumorarten beobachtet und wird im Zusammenhang mit dem epithelialen Differenzierungszustand, der Zellpolarität und mikrodomänenabhängigem Signalverhalten untersucht. Diese Eigenschaften machen MALL relevant für die Erforschung von Mechanismen der Membranorganisation, die Proliferation, Adhäsion und Rezeptordynamik in humanen Zellmodellen modulieren.

Das MALL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MALL-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MALL-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MALL nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MALL-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MALL-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MALL-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MALL-Exone abzielen, die für die MALL-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MALL-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MALL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MALL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MALL-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MALL HDR-Plasmid (h) und MALL HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MALL-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MALL-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.