Plásmido Doble Nickase (h) MAGE-A1: sc-401056-NIC

MAGEA1 codifica MAGE-A1, un antígeno cáncer-testículo normalmente restringido a tejidos de la línea germinal con privilegio inmunitario, pero expresado de forma aberrante en múltiples tipos de tumores, lo que lo convierte en un marcador ampliamente utilizado de programas transcripcionales asociados al tumor. MAGE-A1 puede interactuar con ligasas E3 de ubiquitina y con la maquinaria relacionada de control de calidad proteica, vinculándose así a la regulación de la estabilidad de las proteínas, las respuestas al estrés y el control dependiente del contexto de la señalización celular. Su expresión está influida por mecanismos epigenéticos como la metilación del ADN y la remodelación de la cromatina, conectando a MAGEA1 con vías que gobiernan la represión y la desrepresión transcripcional. En investigación, MAGEA1 se estudia por sus funciones en la presentación de antígenos y el reconocimiento inmunitario, la plasticidad de las células tumorales y cómo la desregulación epigenética permite una expresión génica inapropiada para el linaje.

MAGE-A1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MAGEA1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MAGEA1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MAGEA1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MAGEA1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.