Plasmide CRISPR/Cas9 KO MAGE-A1 (h): sc-401056

Présentation

MAGEA1 code pour MAGE-A1, un antigène cancer-testis normalement restreint aux cellules germinales mais fréquemment réexprimé dans divers cancers, où il peut contribuer à des programmes transcriptionnels et de protéostasie associés à la tumeur. MAGE-A1 appartient à la famille des MAGE de type I et est impliqué dans des interactions protéine–protéine qui modulent des voies dépendantes de l’ubiquitine, notamment la régulation de l’activité des ligases E3 et du renouvellement de composants de signalisation. Une expression aberrante de MAGEA1 est associée à des altérations du contrôle du cycle cellulaire, des réponses au stress et des phénotypes de reconnaissance immunitaire qui façonnent la biologie tumorale. En tant qu’antigène à expression restreinte à une lignée, MAGE-A1 est également largement utilisé comme marqueur moléculaire dans les études de l’immunogénicité tumorale et de la dé-répression épigénétique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MAGE-A1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MAGEA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MAGEA1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MAGEA1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MAGE-A1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MAGEA1 pour l'étude de la signalisation de MAGE-A1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MAGEA1 essentiels à la fonction de MAGE-A1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MAGEA1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MAGE-A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MAGE-A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MAGEA1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MAGE-A1 plasmide HDR (h) et le MAGE-A1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MAGEA1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MAGEA1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.