Plásmido CRISPR de Activación (h) MafB: sc-400554-ACT

MAFB codifica MafB, un factor de transcripción bZIP de la familia Maf grande que se une a elementos de reconocimiento Maf para controlar programas de transcripción específicos de linaje. En tejidos humanos es un regulador clave de la diferenciación mieloide y de macrófagos, de la modulación de la expresión génica inflamatoria y del mantenimiento de estados celulares especializados, incluida la identidad de los podocitos renales y la función de los islotes pancreáticos. MafB integra señales de vías del desarrollo y de respuesta al estrés para coordinar la diferenciación terminal, la maduración celular y la homeostasis tisular. La expresión o actividad desregulada de MAFB se ha asociado con fenotipos inmunitarios e inflamatorios, disfunción glomerular renal y programas de diferenciación celular alterados relevantes para la biología del cáncer.

MafB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAFB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MafB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAFB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAFB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MafB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAFB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MafB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MafB en células tumorales con expresión de MAFB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.