Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MAD2B Double Nickase Plasmid (h2): sc-404007-NIC-2
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MAD2B Double Nickase Plasmid (h2) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MAD2B Double-Nickase-Plasmid (h2) und MAD2B Double-Nickase-Plasmid (h22) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MAD2L2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MAD2B: sc-377367
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MAD2B Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404007-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen MAD2L2 kodiert MAD2B (auch als REV7 bekannt), ein HORMA-Domänenprotein, das die Genomstabilität reguliert, indem es an der Translesions-DNA-Synthese über die DNA-Polymerase ζ beteiligt ist und unter Replikationsstress die DNA-Schadentoleranz koordiniert. MAD2B wirkt außerdem im Shieldin-Komplex, wo es die Wahl des Reparaturwegs bei Doppelstrangbrüchen beeinflusst, nicht-homologes End-Joining fördert und die Endresektion von DNA begrenzt, wodurch es zelluläre Antworten auf genotoxische Schäden mitprägt. Über diese Funktionen beeinflusst MAD2L2 die Checkpoint-Kontrolle, replikationsassoziierte Reparatur sowie die chromatinassoziierte Rekrutierung von Reparaturfaktoren – Prozesse, die bei Krebs und anderen Erkrankungen, die mit defekter DNA-Reparatur zusammenhängen, häufig gestört sind. Forschungswerkzeuge zu MAD2L2/MAD2B unterstützen mechanistische Untersuchungen zur Mutagenese, das Mapping synthetisch-letaler Interaktionen und die funktionelle Analyse von Reparaturweg-Präferenzen in Geneditierungs- und Genomerhaltungsassays.
MAD2B Das Double-Nickase-Plasmid (h2) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MAD2L2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MAD2L2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MAD2L2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MAD2L2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.