Mad 3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406722

Descripción general

MXD3 (Mad 3) es un factor de transcripción de tipo hélice-bucle-hélice básico con cremallera de leucina (bHLH-LZ) que forma heterodímeros con MAX para modular la expresión génica dependiente de cajas E dentro de la red reguladora MYC/MAX/MXD. A diferencia de otros miembros de la familia MXD, que por lo general refuerzan la represión transcripcional y programas de diferenciación, MXD3 se ha vinculado a estados transcripcionales asociados a la proliferación en contextos celulares específicos, influyendo en la progresión del ciclo celular y en las decisiones de linaje. A través de este eje, MXD3 integra señales que moldean las salidas transcripcionales asociadas a la cromatina y puede afectar vías que gobiernan el control del crecimiento y la regulación del desarrollo. Se han reportado alteraciones en la expresión de MXD3 en múltiples conjuntos de datos transcriptómicos relacionados con cáncer, lo que respalda su relevancia para estudiar los circuitos transcripcionales oncogénicos y los fenotipos de crecimiento dependientes del contexto en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Mad 3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MXD3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MXD3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MXD3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Mad 3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MXD3 para la investigación de la señalización de Mad 3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MXD3 críticos para la función de Mad 3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MXD3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Mad 3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Mad 3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MXD3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Mad 3 (h) y el plásmido HDR Mad 3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MXD3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MXD3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.