Mad 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421519

Übersicht

Mxd1 (Mad1) kodiert einen basischen Transkriptionsregulator mit Helix-Loop-Helix-Leucinzipper-Domäne, der MYC-getriebene Genexpression antagonisiert, indem er mit MAX einen Komplex bildet und Corepressor-Komplexe rekrutiert. Über dieses MYC–MAX–MAD-Netzwerk trägt Mad1 zu Transkriptions-Repressionsprogrammen bei, die Zellzyklusprogression, Differenzierung und den zellulären Stoffwechsel steuern. In Mausmodellen wird eine veränderte Mxd1-Aktivität in Kontexten untersucht, in denen die MYC-Signalgebung fehlreguliert ist, darunter onkogene Transformation, hämatopoetische Phänotypen und Musterbildungsprozesse während der Entwicklung. Die Mad1-abhängige Regulation von Chromatin und der Output von RNA-Polymerase II machen Mad1 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um proliferative gegenüber differenzierenden Transkriptionszuständen zu analysieren.

Das Mad 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Mxd1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Mxd1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Mxd1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Mad 1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Mxd1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Mad 1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Mxd1-Exone abzielen, die für die Mad 1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Mxd1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Mad 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Mad 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Mxd1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Mad 1 HDR-Plasmid (m) und Mad 1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Mxd1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Mxd1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.